KV2.2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409737

Panoramica

KCNB2 codifica la subunità del canale del potassio voltaggio-dipendente KV2.2, un canale rettificatore ritardato che modella la ripolarizzazione di membrana e regola i pattern di scarica neuronale. KV2.2 contribuisce al controllo della frequenza dei potenziali d’azione, dell’afterhyperpolarization e della segnalazione dipendente dall’eccitabilità, collegando l’attività elettrica alle dinamiche del calcio e alle risposte trascrizionali a valle. Nel sistema nervoso centrale, i canali della famiglia KV2 influenzano l’integrazione sinaptica e l’eccitabilità di rete, e un’alterata funzione dei canali del potassio è ampiamente associata a disfunzioni neurologiche e a una maggiore suscettibilità a crisi epilettiche e fenotipi del neurosviluppo. KCNB2 umano è quindi un bersaglio utile per analizzare i meccanismi dipendenti dai canali ionici che accoppiano il potenziale di membrana alla fisiologia neuronale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KV2.2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNB2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNB2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNB2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KV2.2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNB2 per lo studio della segnalazione di KV2.2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNB2 critici per la funzione di KV2.2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNB2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KV2.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KV2.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNB2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KV2.2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KV2.2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNB2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNB2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.