KV1.1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403806

Panoramica

KCNA1 codifica la subunità umana del canale del potassio voltaggio-dipendente KV1.1, un componente che forma il poro e contribuisce alle correnti di K+ di tipo delayed rectifier, regolando l’eccitabilità di membrana. KV1.1 influenza la ripolarizzazione del potenziale d’azione, la frequenza di scarica e la trasmissione sinaptica, collegando l’attività del canale alla segnalazione neuronale e alla stabilità delle reti. Attraverso il controllo del potenziale di membrana a riposo e dell’ingresso di Ca2+ dipendente dall’eccitabilità, KV1.1 si interseca con le vie che governano il rilascio di neurotrasmettitori e l’espressione genica dipendente dall’attività. Alterazioni genetiche e funzionali di KCNA1 sono associate a fenotipi neurologici, tra cui l’atassia episodica e la suscettibilità alle crisi epilettiche, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla biologia delle canalopatie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KV1.1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNA1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNA1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNA1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KV1.1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNA1 per lo studio della segnalazione di KV1.1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCNA1 critici per la funzione di KV1.1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNA1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KV1.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KV1.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNA1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KV1.1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KV1.1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNA1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNA1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.