Ku-86 Plasmide Double Nickase (h): sc-400549-NIC

XRCC5 codifica Ku-86 (Ku80), una subunità centrale dell'eterodimero Ku che riconosce le rotture a doppio filamento del DNA e avvia la giunzione non omologa delle estremità nella sua forma canonica (c-NHEJ). Legandosi alle estremità del DNA rotto e reclutando DNA-PKcs per formare il complesso DNA-PK, Ku-86 coordina la processazione delle estremità e la ligazione per preservare l'integrità del genoma durante lo stress replicativo e dopo insulti genotossici. La funzione di Ku-86 si interseca con la ricombinazione V(D)J, la ricombinazione di switch di classe, il mantenimento dei telomeri e i checkpoint di segnalazione del danno al DNA. La disregolazione della riparazione dipendente da XRCC5 è stata associata a fenotipi di instabilità genomica e a una sensibilità alterata agli agenti che danneggiano il DNA, a supporto del suo frequente impiego negli studi di biologia del cancro, immunologia e mantenimento del genoma legato all'invecchiamento.

Ku-86 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus XRCC5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di XRCC5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di XRCC5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con XRCC5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.