Ksr-2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-402872-LAC-2

Il gene umano KSR2 (kinase suppressor of Ras 2) codifica Ksr-2, una pseudochinasi scaffold/regolatoria che organizza la segnalazione RAF–MEK–ERK a valle di RAS per modulare ampiezza, durata e localizzazione subcellulare della via MAPK. Ksr-2 integra inoltre segnali relativi all’energia e ai nutrienti cellulari tramite interazioni con reti associate ad AMPK, collegando la segnalazione dei fattori di crescita all’omeostasi metabolica, alla funzione mitocondriale e alle risposte adattative allo stress energetico. Studi genetici e funzionali associano l’alterazione di KSR2 a disturbi dell’equilibrio energetico e della regolazione neuroendocrina, tra cui obesità grave e insulino-resistenza, evidenziandone il ruolo nel coordinare segnalazione e metabolismo. I reagenti di gene-editing per KSR2 consentono l’analisi meccanicistica del crosstalk tra MAPK e AMPK, del riassetto delle vie di segnalazione e della regolazione specifica per tipo cellulare in modelli cellulari umani pertinenti.

Le particelle di attivazione lentivirale Ksr-2 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KSR2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Ksr-2 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KSR2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Ksr-2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KSR2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.