Klotho Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400970-LAC

Il gene umano **KL** codifica per Klotho, una proteina di membrana di tipo I a singolo passaggio che esiste anche come ectodominio solubile e che svolge un ruolo chiave come modulatore della segnalazione dei fattori di crescita dei fibroblasti e del metabolismo minerale sistemico. In quanto co-recettore obbligato di FGF23, Klotho influenza l’omeostasi del fosfato e della vitamina D e modula gli output a valle delle vie MAPK/ERK e PI3K/AKT nei tessuti responsivi. Klotho è stato inoltre collegato alla regolazione delle risposte allo stress ossidativo, della segnalazione Wnt e dei programmi di senescenza cellulare che influenzano il rimodellamento tissutale e l’omeostasi metabolica. Alterazioni dell’espressione di KL sono state associate a fenotipi rilevanti per la disfunzione renale, la calcificazione vascolare e processi cardiometabolici e neurodegenerativi legati all’invecchiamento, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico in modelli di ricerca focalizzati sulle vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale Klotho (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KL in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Klotho (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Klotho. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KL e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.