KLHDC5 Plasmide Double Nickase (h): sc-410067-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KLHDC5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il KLHDC5 Double Nickase Plasmid (h) e il KLHDC5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KLHL42. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KLHDC5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410067-NIC | 20 µg | $410.00 |
KLHL42 codifica kelch-like family member 42, una proteina con domini BTB–BACK–Kelch che si prevede funzioni da adattatore di substrato all’interno di complessi di ligasi E3 dell’ubiquitina basati su Cullin 3 (CUL3), contribuendo alla proteostasi dipendente dall’ubiquitina. Attraverso il reclutamento selettivo di substrati proteici per l’ubiquitinazione e il successivo turnover, le proteine kelch-like influenzano l’organizzazione del citoscheletro, le risposte allo stress cellulare e l’omeostasi delle reti di segnalazione. La deregolazione delle vie ubiquitina–proteasoma è ampiamente rilevante per la stabilità del genoma, il controllo del ciclo cellulare e la segnalazione oncogenica, rendendo KLHL42 di interesse per studi meccanicistici sul controllo qualità delle proteine nelle cellule umane. L’analisi di KLHL42 può aiutare a chiarire come gli adattatori BTB–Kelch modellino programmi di degradazione specifici del contesto e i fenotipi associati.
KLHDC5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KLHL42 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KLHL42. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KLHL42. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KLHL42 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.