KLF12 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403992-ACT

KLF12 (Krüppel-like factor 12) è un fattore di trascrizione a dita di zinco C2H2 che si lega a elementi promotori ricchi in GC per regolare programmi di espressione genica che controllano proliferazione, differenziamento e plasticità epitelio–mesenchimale. In qualità di regolatore nucleare, KLF12 interagisce con reti trascrizionali che modellano la progressione del ciclo cellulare e la specificazione di linea, con effetti a valle sull’organizzazione del citoscheletro e sulla motilità cellulare. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di KLF12 sono state collegate a un controllo trascrizionale disregolato in processi correlati al cancro, inclusi invasione e comportamento metastatico, e sono state esplorate anche in contesti di regolazione genica rilevanti per lo sviluppo e per l’endocrinologia. La modulazione dei livelli di KLF12 offre un approccio pratico per analizzare circuiti regolatori guidati da fattori di trascrizione e il controllo enhancer–promotore dipendente dal contesto.

KLF12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KLF12 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

KLF12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KLF12 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KLF12, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di KLF12. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KLF12 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da KLF12 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via KLF12 nelle cellule tumorali con espressione di KLF12 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.