KIR4.1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421231

Panoramica

Kcnj10 codifica il canale del potassio a rettificazione entrante KIR4.1, un regolatore chiave del buffering del K⁺ e del potenziale di membrana nelle cellule gliali e in altri tipi cellulari che esprimono KIR4.1 nel topo. Controllando l’omeostasi del potassio extracellulare e accoppiando l’equilibrio ionico al trasporto di acqua, KIR4.1 sostiene l’eccitabilità neuronale, la trasmissione sinaptica e l’osmoregolazione dei tessuti, con collegamenti funzionali all’attività della Na⁺/K⁺-ATPasi e alla ridistribuzione spaziale del K⁺ mediata dagli astrociti. L’alterazione della funzione di KIR4.1 è stata associata a una segnalazione neuro-gliale anomala, a una diversa suscettibilità alle crisi epilettiche e a fenotipi neurologici e neuroevolutivi più ampi, rendendo Kcnj10 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulla biologia dei canali ionici e sulla fisiologia gliale. In ambito sperimentale, KIR4.1 viene anche utilizzato per indagare come la conduttanza del potassio influenzi il metabolismo cellulare, l’attività di rete e le risposte a lesione o infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KIR4.1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Kcnj10 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Kcnj10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Kcnj10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KIR4.1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Kcnj10 per lo studio della segnalazione di KIR4.1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Kcnj10 critici per la funzione di KIR4.1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Kcnj10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KIR4.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal KIR4.1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Kcnj10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KIR4.1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR KIR4.1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Kcnj10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Kcnj10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.