KIF20A Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403194-LAC

KIF20A (membro 20A della famiglia delle chinesine; MKLP2) è una proteina motoria basata sui microtubuli, necessaria per la progressione mitotica, con ruoli chiave nell’organizzazione del fuso, nella segregazione dei cromosomi e nella citochinesi. Coordina la dinamica del fuso centrale/midbody ed è funzionalmente collegata alle reti di regolazione del ciclo cellulare, inclusi i segnali dipendenti da Aurora B e la formazione dell’anello contrattile guidata da RhoA. Un’espressione deregolata di KIF20A è stata associata a fenotipi proliferativi e a un’alterata fedeltà mitotica in diversi contesti oncologici, rendendola un nodo utile per studiare lo stress della divisione cellulare e l’instabilità genomica. La modulazione sperimentale di KIF20A consente di interrogare l’uscita dalla mitosi, la tempistica dell’abscissione e il cross-talk microtubuli–actina in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale KIF20A (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KIF20A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale KIF20A (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KIF20A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di KIF20A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KIF20A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.