Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIF20A (h): sc-403194

Présentation

KIF20A (également appelé MKlp2) code une protéine motrice de type kinésine qui s’associe aux microtubules pour coordonner la progression mitotique, l’assemblage du fuseau central et la cytocinèse. Il contribue à une ségrégation correcte des chromosomes et à la formation du corps médian en régulant la dynamique des microtubules et des processus liés au point de contrôle du fuseau. L’activité de KIF20A est connectée aux voies de contrôle du cycle cellulaire qui gouvernent la transition G2/M et la sortie de mitose, et sa dérégulation est fréquemment étudiée dans des contextes de prolifération aberrante et d’aneuploïdie dans les maladies humaines. En tant que moteur associé à la mitose, KIF20A est largement utilisé comme nœud fonctionnel pour étudier le remodelage du cytosquelette, le positionnement du plan de division et les dépendances de signalisation proliférative dans des modèles de biologie du cancer.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIF20A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KIF20A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KIF20A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KIF20A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIF20A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KIF20A pour l'étude de la signalisation de KIF20A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KIF20A essentiels à la fonction de KIF20A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KIF20A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIF20A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KIF20A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KIF20A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIF20A plasmide HDR (h) et le KIF20A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KIF20A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KIF20A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.