KIF17 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403046-ACT

KIF17 (membro 17 della famiglia delle chinesine) codifica un motore dei microtubuli diretto verso l’estremità “plus” che supporta il trasporto intracellulare nelle cellule polarizzate, con ruoli di rilievo nel traffico dei carichi neuronali e nella compartimentalizzazione delle ciglia. Accoppiando la motilità ATP-dipendente alle dinamiche dei microtubuli, KIF17 contribuisce a processi quali il trasporto dendritico, la funzione sinaptica e la regolazione delle vie di segnalazione associate alle ciglia. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di KIF17 sono state studiate nel contesto di fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi, nonché di difetti di traffico e segnalazione rilevanti per le ciliopatie. Queste caratteristiche rendono KIF17 un bersaglio utile per indagare il trasporto basato sui microtubuli, la biologia cellulare neuronale e le reti regolatorie collegate alle ciglia.

KIF17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KIF17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

KIF17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KIF17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KIF17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di KIF17. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KIF17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da KIF17 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via KIF17 nelle cellule tumorali con espressione di KIF17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.