KIAA2022 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-415544-ACT

KIAA2022 (nota anche come proteina KIAA2022 dell’X-linked intellectual disability) codifica una grande proteina, arricchita nel cervello, implicata nello sviluppo neuronale e nella funzione sinaptica. Sebbene i suoi partner molecolari non siano completamente definiti, diversi studi collegano KIAA2022 alla regolazione della crescita dei neuriti, della morfologia delle spine dendritiche e di programmi trascrizionali dipendenti dall’attività che modellano la connettività neuronale. Alterazioni genetiche o varianti con perdita di funzione in KIAA2022 sono state associate a fenotipi del neurosviluppo, tra cui disabilità intellettiva legata al cromosoma X e caratteristiche correlate allo spettro autistico, a supporto della sua rilevanza per le vie che governano la formazione dei circuiti corticali e l’equilibrio eccitatorio/inibitorio. Come bersaglio di ricerca, KIAA2022 è utile per analizzare reti di regolazione genica in neuroni derivati da iPSC umane e per studiare i processi cellulari che collegano la dinamica del citoscheletro alla maturazione sinaptica.

KIAA2022 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KIAA2022 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

KIAA2022 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KIAA2022 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KIAA2022, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di KIAA2022. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KIAA2022 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da KIAA2022 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via KIAA2022 nelle cellule tumorali con espressione di KIAA2022 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.