KHS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405817

Panoramica

La chinasi chinasi chinasi chinasi 5 attivata da mitogeni (MAP4K5), nota anche come chinasi omologa a SPS1/STE20 (KHS), è una chinasi della famiglia Ste20 a serina/treonina che agisce a monte dei moduli di segnalazione MAPK. MAP4K5 contribuisce alla segnalazione responsiva allo stress e ai processi infiammatori regolando JNK e vie correlate, influenzando programmi trascrizionali che controllano proliferazione, apoptosi e dinamica del citoscheletro. Nelle cellule umane, l’attività di KHS è stata collegata alla modulazione delle risposte immunitarie innate e della segnalazione metabolica, collocando MAP4K5 in reti più ampie che integrano segnali mediati da recettori con cascate di chinasi. La deregolazione della segnalazione di MAP4K5 è stata studiata in contesti quali il rimodellamento delle vie oncogeniche e i meccanismi delle malattie infiammatorie, a supporto del suo impiego come nodo per l’analisi delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KHS (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MAP4K5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MAP4K5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MAP4K5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KHS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MAP4K5 per lo studio della segnalazione di KHS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MAP4K5 critici per la funzione di KHS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MAP4K5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KHS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KHS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MAP4K5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KHS Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KHS (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MAP4K5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MAP4K5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.