KDEL receptor 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426938

Panoramica

Kdelr1 codifica per il recettore KDEL 1, un recettore di smistamento a sette domini transmembrana che riconosce i motivi di recupero C-terminali di tipo KDEL su proteine solubili residenti nel reticolo endoplasmatico (RE) e ne media il trasporto retrogrado dall’apparato di Golgi al RE. Ciclando tra RE e Golgi in modo dipendente dal pH, il recettore KDEL 1 contribuisce a mantenere la proteostasi del RE, sostiene una corretta capacità di ripiegamento e preserva la fedeltà della via secretoria. L’alterazione del traffico RE–Golgi e del controllo di qualità del RE può innescare la segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR) e modificare la secrezione, processi ampiamente implicati nella sensibilità allo stress e in fenotipi associati alla degenerazione nei sistemi sperimentali. Nei modelli murini, la perturbazione di Kdelr1 è quindi rilevante per analizzare l’omeostasi della via secretoria e le risposte cellulari allo stress in tessuti immunitari, neuronali e metabolicamente attivi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Kdelr1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Kdelr1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Kdelr1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KDEL receptor 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Kdelr1 per lo studio della segnalazione di KDEL receptor 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Kdelr1 critici per la funzione di KDEL receptor 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Kdelr1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KDEL receptor 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal KDEL receptor 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Kdelr1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KDEL receptor 1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR KDEL receptor 1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Kdelr1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Kdelr1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.