KCTD5 Plasmide Double Nickase (m): sc-427353-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KCTD5 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il KCTD5 Double Nickase Plasmid (m) e il KCTD5 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Kctd5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KCTD5 Plasmide Double Nickase (m) | sc-427353-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Kctd5** codifica **KCTD5**, una proteina contenente il dominio BTB/POZ che funge da adattatore nei complessi di ubiquitina ligasi E3 cullin-RING, supportando il riconoscimento dei substrati e il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. Attraverso la regolazione della proteostasi, KCTD5 può influenzare la progressione del ciclo cellulare, la trasduzione del segnale e processi sinaptici o neuronali modulando la stabilità dei componenti delle vie di segnalazione. Un’alterata attività della via ubiquitina–proteasoma è ampiamente rilevante per fenotipi neuroevolutivi e per il rimodellamento della segnalazione associato al cancro, rendendo **Kctd5** un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo di qualità delle proteine. Nei sistemi modello murini, la perturbazione di **Kctd5** aiuta a indagare come l’ubiquitinazione si interfacci con le risposte cellulari allo stress e con i programmi di differenziamento.
KCTD5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Kctd5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Kctd5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Kctd5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Kctd5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.