KCTD5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409961

Panoramica

KCTD5 codifica una proteina contenente un dominio di tetramerizzazione dei canali del potassio, che funge da adattatore nell’omeostasi proteica dipendente dall’ubiquitina, spesso agendo con complessi di ligasi E3 basati su CUL3 per influenzare l’ubiquitinazione e il turnover dei substrati. Attraverso queste interazioni, KCTD5 può incidere sulla dinamica delle reti di segnalazione e sulla proteostasi cellulare, inclusi processi legati alla funzione neuronale e a vie responsivi allo stress. Un’alterata regolazione degli adattatori della famiglia KCTD è stata associata a una degradazione proteica deregolata e a output di segnalazione perturbati, caratteristiche ricorrenti nella biologia del cancro e nei disturbi neurobiologici. Di conseguenza, KCTD5 viene studiata come nodo modulatore che collega la macchina dell’ubiquitinazione al controllo delle vie di segnalazione e al fenotipo cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KCTD5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCTD5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCTD5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCTD5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KCTD5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCTD5 per lo studio della segnalazione di KCTD5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KCTD5 critici per la funzione di KCTD5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCTD5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KCTD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KCTD5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCTD5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KCTD5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KCTD5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCTD5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCTD5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.