KCNQ3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403544-ACT

KCNQ3 codifica la subunità del canale del potassio voltaggio-dipendente Kv7.3, componente centrale delle correnti neuronali di tipo M (K⁺) che stabilizzano il potenziale di membrana e limitano lo scaricamento ripetitivo. Modellando l’eccitabilità sottosoglia e l’adattamento della frequenza di scarica, KCNQ3 influenza l’integrazione sinaptica e le oscillazioni di rete, intersecandosi con la segnalazione colinergica e fosfoinositide-dipendente che modula il gating del canale. Alterazioni dell’espressione o della funzione di KCNQ3 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi ed epilettici, sottolineandone la rilevanza negli studi sull’eccitabilità corticale e sull’omeostasi dei circuiti. KCNQ3 umano è quindi ampiamente utilizzato nella ricerca meccanicistica sulla regolazione dei canali ionici, sulle vie di segnalazione neuronale e sulle relazioni genotipo–fenotipo nei disturbi dell’eccitabilità.

KCNQ3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KCNQ3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

KCNQ3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KCNQ3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KCNQ3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di KCNQ3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KCNQ3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da KCNQ3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via KCNQ3 nelle cellule tumorali con espressione di KCNQ3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.