KCNQ2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402492-NIC

KCNQ2 codifica una subunità di un canale del potassio voltaggio-dipendente che si assembla in correnti neuronali di tipo M (Kv7), contribuendo a determinare il potenziale di membrana a riposo e a regolare la generazione dei potenziali d’azione. Controllando l’eccitabilità sotto-soglia e l’adattamento della frequenza di scarica, KCNQ2 si inserisce in processi di segnalazione che mettono in relazione la dinamica del voltaggio di membrana con la neurotrasmissione e la stabilità della rete. Alterazioni della funzione di KCNQ2 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e legati all’epilessia, rendendolo un bersaglio chiave per analizzare i meccanismi dell’eccitabilità e della regolazione dei circuiti sinaptici in modelli cellulari umani. Tra le applicazioni di ricerca più comuni rientrano lo studio della biofisica dei canali ionici, degli esiti della differenziazione neuronale e delle modifiche a livello di via nell’espressione genica dipendente dall’attività.

KCNQ2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KCNQ2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KCNQ2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KCNQ2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KCNQ2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.