KCC1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422973

Panoramica

Slc12a4 codifica il cotrasportatore K–Cl murino KCC1 (SLC12A4), un trasportatore elettroneutro che accoppia l’efflusso di K+ e Cl− per regolare il cloruro intracellulare, il volume cellulare e l’omeostasi ionica. L’attività di KCC1 contribuisce ai meccanismi di riduzione del volume regolata (RVD), alle risposte allo stress osmotico e alla segnalazione dipendente dal cloruro, che può influenzare il potenziale di membrana e la dinamica del citoscheletro. Nelle linee ematopoietiche e immunitarie, KCC1 sostiene programmi di flusso ionico legati all’idratazione degli eritrociti e agli stati di attivazione dei leucociti, fornendo un contesto meccanicistico per lo studio della fisiologia guidata dal trasporto. Un trasporto K–Cl deregolato è stato associato ad alterazioni delle proprietà dei globuli rossi e a fenotipi infiammatori o metabolici più ampi, rendendo Slc12a4 un nodo utile per la ricerca sul trasporto ionico e sull’omeostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KCC1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc12a4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc12a4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc12a4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KCC1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc12a4 per lo studio della segnalazione di KCC1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc12a4 critici per la funzione di KCC1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc12a4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal KCC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal KCC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc12a4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal KCC1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR KCC1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc12a4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc12a4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.