karyopherin α1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402324-NIC

KPNA1 codifica la carioferina alfa 1 (importina-α5), un adattatore della via classica di importazione nucleare che riconosce segnali basici di localizzazione nucleare (NLS) sulle proteine cargo e le accoppia all’importina-β per la traslocazione attraverso il complesso del poro nucleare dipendente dalla GTPasi Ran. Controllando il traffico nucleo-citoplasmatico, KPNA1 influenza la progressione del ciclo cellulare, la segnalazione del danno al DNA, le risposte trascrizionali dell’immunità innata e i programmi di adattamento allo stress, regolando l’accesso nucleare di fattori di trascrizione ed enzimi regolatori. Un trasporto mediato dalle importine alterato è stato associato a reti di segnalazione deregolate e al rimodellamento degli stati di espressione genica osservati nel cancro e in contesti neurodegenerativi e infiammatori. KPNA1 è inoltre studiato nelle interazioni ospite–patogeno, in cui l’importazione nucleare di effettori virali o batterici può influenzare la replicazione e i meccanismi di evasione immunitaria.

karyopherin α1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KPNA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KPNA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KPNA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KPNA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.