Kaiso Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417904

Panoramica

ZBTB33 codifica Kaiso, un fattore di trascrizione a dita di zinco con dominio BTB/POZ che si lega a siti di legame specifici per Kaiso e a dinucleotidi CpG metilati per modulare i programmi di espressione genica. Attraverso interazioni con complessi corepressori e componenti di segnalazione della famiglia delle catenine, Kaiso contribuisce a coordinare la repressione trascrizionale dipendente dalla cromatina e lo switching trascrizionale dipendente dal contesto. Le reti regolate da Kaiso intersecano vie che controllano la differenziazione epiteliale, l’adesione cellula-cellula e gli output trascrizionali associati a Wnt/β-catenina. Un’attività deregolata di ZBTB33 o un’occupazione alterata di Kaiso sono state studiate in oncologia, dove lo stato epigenetico e il riorientamento dei programmi trascrizionali contribuiscono a fenotipi invasivi e alla progressione tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Kaiso (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ZBTB33 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ZBTB33 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ZBTB33 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Kaiso.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ZBTB33 per lo studio della segnalazione di Kaiso, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ZBTB33 critici per la funzione di Kaiso
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ZBTB33 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Kaiso CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Kaiso CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ZBTB33. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Kaiso Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Kaiso (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ZBTB33 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ZBTB33 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.