JNK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424053-ACT

Mapk8 codifica a c-Jun N-terminal kinase 1 (JNK1), uma quinase MAP ativada por estresse que integra sinais extracelulares para regular transcrição, apoptose, proliferação e sinalização de citocinas. A JNK1 fosforila JUN e outros componentes do AP-1 a jusante das cascatas MAP3K/MKK4/7, moldando programas gênicos envolvidos em inflamação e na adaptação celular ao estresse oxidativo, genotóxico e do retículo endoplasmático (RE). Em modelos murinos, a atividade de JNK1 é amplamente utilizada para estudar sinalização imune, homeostase metabólica e respostas neuronais ao estresse, com a desregulação da via associada a fenótipos inflamatórios crônicos e remodelamento tecidual. Essas funções tornam o Mapk8 um nó central para investigar o crosstalk de MAPK com NF-κB, a sinalização da insulina e vias de estresse mitocondrial.

JNK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mapk8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

JNK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mapk8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mapk8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de JNK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mapk8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de JNK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via JNK1 em células tumorais com expressão de Mapk8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.