JMJD2A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432966

Panoramica

Kdm4a codifica la demetilasi murina delle lisine istoniche JMJD2A (KDM4A), un enzima con dominio JmjC che rimuove marcature metiliche repressive e attivanti su H3K9 e H3K36, modellando l’accessibilità della cromatina e i programmi trascrizionali. Collegando lo stato epigenetico ai processi guidati dal DNA, JMJD2A influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress replicativo e la stabilità del genoma, e interagisce con vie che regolano la differenziazione e la trascrizione responsiva agli ormoni. Un’attività deregolata della famiglia KDM4 è stata associata ad alterazioni della segnalazione oncogenica, a difetti nella riparazione del DNA e a un’espressione aberrante di geni dello sviluppo, rendendo Kdm4a un bersaglio comune negli studi sui meccanismi di malattia guidati dalla cromatina. Nei sistemi murini, la perturbazione di Kdm4a è spesso impiegata per indagare come le dinamiche di metilazione degli istoni coordinino le reti trascrizionali e la plasticità cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO JMJD2A (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Kdm4a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Kdm4a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Kdm4a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina JMJD2A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Kdm4a per lo studio della segnalazione di JMJD2A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Kdm4a critici per la funzione di JMJD2A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Kdm4a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal JMJD2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal JMJD2A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Kdm4a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal JMJD2A Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR JMJD2A (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Kdm4a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Kdm4a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.