JAK1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421199-ACT

Mouse Jak1 codifica la Janus chinasi 1 (JAK1), una tirosin-chinasi non recettoriale che collega i recettori delle citochine ai fattori di trascrizione STAT a valle, coordinando la segnalazione immunitaria innata e adattativa. JAK1 è centrale nelle vie di segnalazione dell’interferone, della famiglia dell’IL-6 e delle citochine della catena γ comune, modellando le risposte antivirali, i programmi genici infiammatori e lo sviluppo dei linfociti. Oltre alla via JAK–STAT, la segnalazione guidata da JAK1 interseca le reti MAPK e PI3K/AKT, influenzando proliferazione, sopravvivenza e differenziamento. Un’attività o un’espressione di JAK1 deregolata è spesso studiata nella patobiologia dell’infiammazione e nei meccanismi di malattie associate al sistema immunitario, nonché in contesti di segnalazione oncogena in cui i segnali citochinici rimodellano le interazioni tra tumore e sistema immunitario.

JAK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Jak1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JAK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Jak1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Jak1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JAK1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Jak1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JAK1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JAK1 nelle cellule tumorali con espressione di Jak1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.