Jagged1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421197

Panoramica

Jag1 codifica il ligando di membrana Jagged1, un attivatore canonico dei recettori Notch che regola la segnalazione juxtacrina, la quale controlla decisioni sul destino cellulare, la formazione di confini e la strutturazione dei tessuti nel topo. L’interazione Jagged1–Notch innesca il rilascio proteolitico del dominio intracellulare di Notch e una riprogrammazione trascrizionale mediata dai complessi RBPJ/CSL, plasmando processi quali l’angiogenesi, il mantenimento di cellule staminali e progenitrici e le interazioni epitelio–mesenchimali. In modelli di sviluppo e di malattia, alterazioni della segnalazione Jag1/Notch sono collegate a una differenziazione disregolata, a un rimodellamento vascolare aberrante e a cambiamenti nel comportamento di cellule immunitarie e stromali. Poiché l’output di Notch è fortemente dipendente dal contesto, la perdita di funzione di Jag1 offre un modo diretto per analizzare in vivo e in colture cellulari soglie di segnalazione specifiche del ligando e il crosstalk tra vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Jagged1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Jag1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Jag1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Jag1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Jagged1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Jag1 per lo studio della segnalazione di Jagged1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Jag1 critici per la funzione di Jagged1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Jag1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Jagged1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Jagged1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Jag1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Jagged1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Jagged1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Jag1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Jag1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.