JAB1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-424107-LAC

Mouse Cops5 codifica JAB1 (nota anche come CSN5), la subunità catalitica del signalosoma COP9 che controlla il turnover proteico regolando le ubiquitin ligasi cullin-RING attraverso la deneddilazione. Modulando la degradazione dipendente dall’ubiquitina, JAB1 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e i programmi trascrizionali di adattamento allo stress, inclusa la modulazione dell’attività di AP-1 e dei pathway collegati alla stabilità degli inibitori delle CDK. JAB1 interagisce inoltre con processi di segnalazione e di navettamento nucleo-citoplasma che influenzano proliferazione e differenziamento, rendendola rilevante per modelli di crescita deregolata e di rimodellamento tissutale associato all’infiammazione. Un’alterata attività di CSN5/JAB1 è stata associata a una riprogrammazione di pathway oncogenici e a cambiamenti nella segnalazione immunitaria, a supporto della sua utilità in studi meccanicistici sulla proteostasi e sul cross-talk tra vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale JAB1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Cops5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale JAB1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Cops5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di JAB1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Cops5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.