ITI-H4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403358

Panoramica

ITIH4 codifica la catena pesante H4 dell’inibitore inter-α-trypsin (ITI-H4), una glicoproteina secreta arricchita nel fegato che si associa alla famiglia degli inibitori inter-α e contribuisce all’organizzazione della matrice extracellulare e alla modulazione dell’attività delle proteasi in circolo. ITI-H4 è collegata alla biologia dell’infiammazione e della fase acuta, con una regolazione influenzata da vie guidate dalle citochine che rimodellano la composizione delle proteine plasmatiche durante il danno tissutale e le risposte immunitarie. Alterazioni dell’espressione e del processamento di ITIH4 sono state riportate in molteplici contesti patologici, inclusi disturbi infiammatori e firme proteomiche associate al cancro, a supporto del suo impiego come bersaglio di ricerca meccanicistica e vicino all’ambito dei biomarcatori. In quanto fattore solubile che influenza il microambiente extracellulare e le interazioni cellula–matrice, ITIH4 è rilevante per lo studio delle vie che governano infiammazione, rimodellamento tissutale e regolazione del microambiente.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ITI-H4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ITIH4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ITIH4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ITIH4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ITI-H4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ITIH4 per lo studio della segnalazione di ITI-H4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ITIH4 critici per la funzione di ITI-H4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ITIH4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ITI-H4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ITI-H4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ITIH4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ITI-H4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ITI-H4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ITIH4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ITIH4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.