ITI-H4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403358-ACT

ITIH4は、インターαトリプシン阻害因子重鎖4（inter-α-trypsin inhibitor heavy chain 4：ITI-H4）をコードする。ITI-H4は肝臓で高発現する分泌性糖タンパク質で、血漿中を循環し、細胞外マトリックス（ECM）生物学や、プロテアーゼにより制御される炎症過程に関与する。ITI-H4は、インターα阻害因子ファミリーのネットワーク内での相互作用を介して、急性期反応に伴うタンパク質分解やヒアルロン酸に富むマトリックスのリモデリングと関連し、損傷や炎症時の組織恒常性に影響を与える。ITIH4の発現やプロセシングの変化は、全身性炎症状態や複数のがん関連プロテオームシグネチャーで報告されており、疾患関連セクレトーム研究における機構的な指標（readout）として有用であることを示している。細胞モデルおよび血漿モデルでは、ITI-H4は、肝臓由来のプログラムが細胞外シグナル伝達、凝固に隣接する経路、ならびに免疫—間質クロストークをどのように形成するかを検討するための扱いやすい結節点となる。

ITI-H4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ITIH4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ITI-H4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ITIH4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はITIH4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ITI-H4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のITIH4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるITI-H4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびITIH4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるITI-H4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。