Plásmido Doble Nickase (h) ITI-H3: sc-404269-NIC

ITIH3 codifica la cadena pesada 3 del inhibidor inter-α-tripsina (ITI-H3), una proteína asociada a la matriz extracelular que contribuye a la estabilización de matrices ricas en hialuronano mediante reacciones de transferencia covalente mediadas por el sistema del inter-α-inhibidor. Al dar forma a la arquitectura de la matriz pericelular, ITI-H3 influye en la adhesión y la migración celular, así como en procesos de remodelación tisular que se entrecruzan con la señalización inflamatoria y las vías de respuesta a heridas. Se han descrito alteraciones en la expresión de ITIH3 o en su incorporación a la matriz en contextos de fibrosis, inflamación crónica y remodelación del microambiente tumoral, lo que respalda su valor como un nodo mecanístico que vincula la dinámica de la matriz extracelular con fenotipos asociados a enfermedad. En investigación biomédica, ITIH3 se estudia comúnmente por sus funciones en las interacciones estroma–epitelio, la función de barrera y la regulación de proteasas extracelulares.

ITI-H3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITIH3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITIH3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITIH3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITIH3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.