IST1 Plasmide Double Nickase (h): sc-411346-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IST1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IST1 Double Nickase Plasmid (h) e il IST1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira IST1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IST1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-411346-NIC | 20 µg | $410.00 |
IST1 umano (increased sodium tolerance 1 homolog) codifica una componente del macchinario associato a ESCRT-III che coordina il rimodellamento e la scissione delle membrane endosomiali. IST1 interagisce con le proteine CHMP e con l’ATPasi AAA VPS4 per supportare la biogenesi dei corpi multivescicolari, lo smistamento endosomiale e l’abscissione durante il completamento della citocinesi. Attraverso il suo ruolo nella scissione di membrana dipendente da ESCRT, IST1 influenza il traffico dei recettori e la proteostasi, processi spesso alterati nel cancro e nella neurodegenerazione. Un’alterata funzione di ESCRT è stata inoltre collegata a difetti nella stabilità del genoma e nella segnalazione infiammatoria, rendendo IST1 un utile punto di partenza per studiare le risposte allo stress accoppiate al traffico di membrana.
IST1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IST1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IST1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IST1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IST1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.