Islet-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401733-ACT

L’ISL1 umano codifica Islet-1, un fattore di trascrizione LIM homeobox che agisce come regolatore specificatore di linea durante lo sviluppo embrionale. ISL1 si integra con programmi trascrizionali fondamentali e con reti di regolazione della cromatina per controllare l’espressione genica nei progenitori endocrini pancreatici, nei motoneuroni e nei derivati del secondo campo cardiaco, influenzando differenziamento, migrazione e maturazione. Coordinandosi con vie che governano l’organogenesi e le decisioni di destino cellulare, ISL1 contribuisce a definire l’identità endocrina e i programmi neurogenici in modo dipendente dal contesto. Un’espressione deregolata di ISL1 o alterazioni dei circuiti a valle sono state associate ad anomalie dello sviluppo, e ISL1 è frequentemente utilizzato come marcatore molecolare e nodo meccanicistico negli studi sulla biologia delle cellule beta legata al diabete, sulla cardiogenesi e sui processi di neurosviluppo.

Islet-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ISL1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Islet-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ISL1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ISL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Islet-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ISL1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Islet-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Islet-1 nelle cellule tumorali con espressione di ISL1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.