IRX1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421153

Panoramica

Irx1 codifica il fattore di trascrizione omeobox della famiglia Iroquois IRX1, un regolatore nucleare legante il DNA che contribuisce al patterning dei tessuti embrionali e orienta la specificazione delle linee cellulari. Durante lo sviluppo del topo, IRX1 partecipa a programmi trascrizionali che governano la morfogenesi, le decisioni di destino cellulare e l’organizzazione spaziale degli abbozzi d’organo, integrandosi con reti regolatorie più ampie guidate da geni omeobox. Un’espressione deregolata di IRX1 o un controllo regolatorio alterato sono stati associati ad anomalie dello sviluppo e sono stati studiati nel contesto di stati di differenziazione aberranti rilevanti per la biologia del cancro. In quanto nodo trascrizionale, IRX1 viene comunemente indagato per i suoi geni bersaglio a valle, le dipendenze dallo stato della cromatina e il cross-talk con le vie di segnalazione che plasmano l’identità tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IRX1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Irx1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Irx1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Irx1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IRX1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Irx1 per lo studio della segnalazione di IRX1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Irx1 critici per la funzione di IRX1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Irx1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IRX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IRX1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Irx1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IRX1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IRX1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Irx1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Irx1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.