IRS-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400474

Panoramica

Il substrato del recettore dell’insulina 2 (IRS-2) è una proteina adattatrice citoplasmatica che collega i recettori dell’insulina e dell’IGF-1 attivati alla segnalazione a valle attraverso le vie PI3K–AKT e RAS–MAPK. Tramite fosforilazione su tirosina mediata dal recettore, IRS2 recluta effettori con dominio SH2 per regolare il metabolismo del glucosio, l’omeostasi lipidica, la crescita cellulare, la sopravvivenza e la differenziazione. La segnalazione dipendente da IRS2 contribuisce all’azione dell’insulina nel fegato, alla funzione delle cellule β pancreatiche e all’equilibrio energetico; la sua disregolazione è spesso studiata nell’insulino-resistenza, nel diabete di tipo 2, nell’obesità e in fenotipi metabolici correlati. Alterazioni della segnalazione di IRS2 sono state inoltre implicate in effetti dipendenti dal contesto su proliferazione e motilità, supportandone l’impiego nella ricerca sui pathway e sui meccanismi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IRS-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IRS2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IRS2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IRS2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IRS-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IRS2 per lo studio della segnalazione di IRS-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IRS2 critici per la funzione di IRS-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IRS2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IRS-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IRS-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IRS2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IRS-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IRS-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IRS2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IRS2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.