IRF3 Plasmide Double Nickase (h): sc-417171-NIC

Il fattore regolatore dell’interferone 3 (IRF3) è un fattore di trascrizione espresso in modo ubiquitario che coordina le prime risposte immunitarie innate al rilevamento di virus e acidi nucleici citosolici. Una volta attivato a valle delle vie dei recettori di riconoscimento del pattern, inclusi cGAS–STING, RIG-I/MDA5–MAVS e TLR3–TRIF, IRF3 viene fosforilato da TBK1/IKKε, dimerizza e trasloca nel nucleo per indurre interferoni di tipo I e geni stimolati dall’interferone. Attraverso questo programma, IRF3 modella la restrizione antivirale, il crosstalk della segnalazione infiammatoria con NF-κB e gli esiti dello stress cellulare, come l’apoptosi. Un’attività deregolata di IRF3 è stata implicata nell’aberrante segnalazione dell’interferone osservata in ambito infettivologico, in fenotipi autoinfiammatori e nelle interazioni tra tumore e sistema immunitario, rendendolo un nodo centrale per studi meccanicistici sull’immunità innata.

IRF3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus IRF3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di IRF3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di IRF3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con IRF3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.