Partículas Lentivirales de Activación (m) IP3R-I: sc-421192-LAC

Itpr1 codifica el receptor de inositol 1,4,5-trifosfato tipo 1 (IP3R-I), un importante canal de liberación de Ca²⁺ del retículo endoplásmico que acopla la señalización de la fosfolipasa C activada por receptores con la movilización intracelular de calcio. Tras la unión de IP3, IP3R-I media oscilaciones y ondas de calcio que modulan vías posteriores, incluidas CaMK, la señalización calcineurina–NFAT, el metabolismo mitocondrial y la transcripción dependiente de la actividad. En el ratón, IP3R-I es muy relevante para la excitabilidad neuronal y la plasticidad sináptica, y sus funciones de manejo de calcio también influyen en la secreción, la remodelación del citoesqueleto y las decisiones de destino celular. La alteración de la homeostasis del calcio dependiente de ITPR1/IP3R-I se asocia estrechamente con la neurodegeneración y la disfunción cerebelosa, lo que lo convierte en un objetivo clave para estudios mecanísticos de redes de señalización impulsadas por el calcio.

Las partículas de activación lentiviral IP3R-I (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Itpr1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral IP3R-I (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Itpr1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de IP3R-I. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Itpr1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.