IP3KA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404638
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- IP3KA O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico IP3KA, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:IP3KA Anticorpo (F-3): sc-271838
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
IP3KA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404638 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
ITPKA codifica a inositol-trifosfato 3-quinase A (IP3KA), uma enzima enriquecida em neurônios que fosforila o inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) para gerar IP4, remodelando assim a dinâmica da sinalização intracelular de Ca2+. Ao modular a liberação de cálcio dependente de IP3 a partir do retículo endoplasmático, a IP3KA influencia a atividade sináptica, a remodelação de espinhas dendríticas e a transdução de sinais dependente de atividade. Essa via se cruza com o metabolismo de fosfoinositídeos e com redes de quinases reguladas por cálcio que coordenam a organização do citoesqueleto e respostas transcricionais. A desregulação da sinalização IP3KA/IP3 tem sido implicada em alterações da plasticidade neuronal e em outros fenótipos de sinalização relevantes para a neurobiologia e para a remodelação de vias associadas ao câncer.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO IP3KA (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ITPKA em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ITPKA, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ITPKA na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína IP3KA.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ITPKA para a investigação da sinalização de IP3KA, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ITPKA críticos para a função IP3KA
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ITPKA para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo IP3KA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo IP3KA Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ITPKA. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo IP3KA Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR IP3KA (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ITPKA para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ITPKA definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.