IP3KA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404638
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IP3KA Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico IP3KA, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IP3KA Antibody (F-3): sc-271838
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IP3KA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-404638 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
ITPKA codifica l’inositolo-trifosfato 3-chinasi A (IP3KA), un enzima arricchito nei neuroni che fosforila l’inositolo 1,4,5-trifosfato (IP3) per generare IP4, rimodellando così la dinamica della segnalazione intracellulare del Ca2+. Modulando il rilascio di calcio dipendente da IP3 dal reticolo endoplasmatico, IP3KA influenza l’attività sinaptica, il rimodellamento delle spine dendritiche e la trasduzione del segnale dipendente dall’attività. Questa via si interseca con il metabolismo dei fosfoinositidi e con reti di chinasi regolate dal calcio che coordinano l’organizzazione del citoscheletro e le risposte trascrizionali. Una deregolazione della segnalazione IP3KA/IP3 è stata implicata in alterazioni della plasticità neuronale e in altri fenotipi di segnalazione rilevanti per la neurobiologia e per il rimodellamento di vie associate al cancro.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IP3KA (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ITPKA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ITPKA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ITPKA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IP3KA.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ITPKA per lo studio della segnalazione di IP3KA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni ITPKA critici per la funzione di IP3KA
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ITPKA per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal IP3KA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IP3KA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ITPKA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal IP3KA Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IP3KA (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ITPKA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ITPKA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.