Integrin αV/ITGAV/CD51 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400506-ACT

ITGAV codifica l’integrina αV (CD51), una subunità α che eterodimerizza con molteplici partner β (ad es. β3, β5, β6, β8) per formare recettori per ligandi della matrice extracellulare contenenti motivi RGD, come vitronectina, fibronectina e osteopontina. Attraverso il legame al ligando e il clustering delle integrine, le integrine contenenti αV coordinano l’assemblaggio delle adesioni focali e la meccanotrasduzione, attivando la segnalazione FAK/SRC e le vie a valle PI3K–AKT e MAPK, che regolano adesione, migrazione, sopravvivenza e rimodellamento del citoscheletro. ITGAV interagisce inoltre con la biologia del TGF-β tramite l’attivazione del TGF-β latente mediata da αVβ6/αVβ8, collegando il rilevamento della matrice a programmi infiammatori e fibrotici. Un’attività di ITGAV deregolata è stata associata a comportamento cellulare invasivo, risposte angiogeniche e fenotipi di rimodellamento rilevanti per la progressione del cancro, la fibrosi e le interazioni con il microambiente immunitario.

Integrin αV/ITGAV/CD51 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGAV senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin αV/ITGAV/CD51 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGAV nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGAV, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin αV/ITGAV/CD51. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGAV nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin αV/ITGAV/CD51 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin αV/ITGAV/CD51 nelle cellule tumorali con espressione di ITGAV silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.