Integrin αL/ITGAL/CD11a Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402246-ACT

ITGAL codifica a integrina αL (CD11a), que forma um heterodímero com a integrina β2 (CD18) para constituir a LFA-1, um dos principais recetores de adesão em leucócitos. A LFA-1 medeia a adesão firme e a transmigração ao ligar-se a ligandos da família ICAM e coordena a sinalização “outside-in”, que remodela o citoesqueleto de actina, sustenta a formação da sinapse imunológica e ajusta os limiares de ativação das células T. A atividade de ITGAL é regulada por sinalização “inside-out” das integrinas a jusante de recetores de quimiocinas e da sinalização do TCR, ligando-a ao tráfego de leucócitos, ao reconhecimento de antigénios e às respostas inflamatórias. A disfunção de ITGAL/LFA-1 tem sido associada a alterações na adesão e na sinalização de células imunitárias em contextos de doenças autoimunes e inflamatórias, bem como em interações tumor–sistema imunitário, tornando-a um nó útil para estudos de imunologia mecanística.

Integrin αL/ITGAL/CD11a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGAL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin αL/ITGAL/CD11a O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGAL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGAL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin αL/ITGAL/CD11a. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGAL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin αL/ITGAL/CD11a no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin αL/ITGAL/CD11a em células tumorais com expressão de ITGAL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.