Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421160

Panoramica

Itga2b codifica l’integrina αIIb (CD41), che si associa all’integrina β3 (CD61) per formare il recettore piastrinico del fibrinogeno αIIbβ3, un mediatore centrale dell’adesione e dell’aggregazione piastrinica. In seguito all’attivazione, αIIbβ3 va incontro a segnali “inside-out” e “outside-in” che collegano ligandi della matrice extracellulare, come fibrinogeno e fattore di von Willebrand, al rimodellamento del citoscheletro, alla dinamica delle adesioni focali e a vie di segnalazione dipendenti da Src/FAK. Nei topi, l’espressione di Itga2b indica l’impegno nella linea megacariocitaria e sostiene la produzione di piastrine e le risposte emostatiche. La disregolazione della segnalazione integrinica e l’alterata attivazione piastrinica sono ampiamente rilevanti per studi su trombocitopenia, fenotipi emorragici, trombosi associata all’infiammazione e crosstalk piastrine–sistema immunitario in modelli di malattia vascolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Itga2b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Itga2b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Itga2b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Integrin αIIb/ITGA2B/CD41.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Itga2b per lo studio della segnalazione di Integrin αIIb/ITGA2B/CD41, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Itga2b critici per la funzione di Integrin αIIb/ITGA2B/CD41
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Itga2b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Itga2b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Itga2b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Itga2b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.