Integrin αE/ITGAE/CD103 Plasmide di attivazione CRISPR (m2): sc-421166-ACT-2

Il gene murino Itgae codifica l’integrina αE (CD103), un recettore di adesione αEβ7 che si lega alla E-caderina per favorire la ritenzione e il posizionamento dei linfociti residenti nei tessuti, in particolare dei linfociti T CD8⁺ e dei linfociti T regolatori, all’interno di compartimenti epiteliali e mucosali. ITGAE è coinvolto nella segnalazione mediata dalle integrine e nel rimodellamento del citoscheletro, influenzando la formazione della sinapsi immunologica, la migrazione e la sorveglianza immunitaria locale nei tessuti di barriera. Un’espressione alterata di CD103 è spesso utilizzata per definire gli stati immunitari residenti nei tessuti ed è implicata in meccanismi di infiammazione cronica, nelle interazioni tumore–sistema immunitario e nelle risposte immunitarie correlate al trapianto in modelli sperimentali. L’editing genetico di Itgae nel topo supporta studi sul traffico leucocitario, sul dialogo tra epitelio e cellule immunitarie e sulla dissezione funzionale delle vie dipendenti da αEβ7 mediante fenotipizzazione con citofluorimetria, saggi di homing in vivo e profilazione della residenza tissutale.

Integrin αE/ITGAE/CD103 Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Itgae senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin αE/ITGAE/CD103 Il plasmide di attivazione CRISPR (m2) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Itgae nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Itgae, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin αE/ITGAE/CD103. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Itgae nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin αE/ITGAE/CD103 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin αE/ITGAE/CD103 nelle cellule tumorali con espressione di Itgae silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.