Integrin α9/ITGA9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402221-ACT

ITGA9 codifica l’integrina α9, una subunità α che eterodimerizza con l’integrina β1 formando un recettore di superficie cellulare che media l’adesione a ligandi della matrice extracellulare (ECM) come tenascina-C, osteopontina e VCAM1. La segnalazione dell’integrina α9β1 coordina il rimodellamento del citoscheletro, la dinamica delle adesioni focali e la migrazione cellulare attraverso vie che coinvolgono FAK/SRC, PI3K–AKT e le GTPasi della famiglia Rho, influenzando così il rimodellamento tissutale e il traffico delle cellule infiammatorie. L’attività di ITGA9 è stata collegata a processi quali angiogenesi, riparazione delle ferite e sviluppo delle valvole linfatiche, e la sua espressione alterata è studiata nel contesto di fibrosi, infiammazione cronica e invasività delle cellule tumorali. In quanto recettore associato alla meccanotrasduzione, l’integrina α9 rappresenta uno strumento utile per indagare come la composizione e la rigidità della ECM modellino il comportamento cellulare.

Integrin α9/ITGA9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin α9/ITGA9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin α9/ITGA9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin α9/ITGA9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin α9/ITGA9 nelle cellule tumorali con espressione di ITGA9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.