Integrin β8/ITGB8 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-435838-LAC

Il gene murino *Itgb8* codifica per l’integrina β8 (ITGB8), una subunità β che si associa principalmente con αv per formare il recettore αvβ8, che media l’adesione cellula–matrice extracellulare e la segnalazione bidirezionale. ITGB8 è un regolatore chiave dell’attivazione del TGF-β latente sulla superficie cellulare, collegando l’interazione con la matrice a programmi trascrizionali dipendenti da SMAD che influenzano le interazioni epitelio–mesenchimali, la modulazione immunitaria e il rimodellamento tissutale. Attraverso complessi associati alle integrine che coinvolgono la segnalazione delle adesioni focali e la dinamica del citoscheletro, ITGB8 contribuisce a coordinare migrazione, funzione di barriera e meccanotrasduzione. Un’attività di ITGB8 deregolata è stata associata a processi di rimodellamento patologico, inclusi fibrosi e invasione correlata al cancro, rendendola un bersaglio rilevante per lo studio di reti di segnalazione dipendenti dal microambiente.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin β8/ITGB8 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Itgb8 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Integrin β8/ITGB8 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Itgb8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Integrin β8/ITGB8. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Itgb8 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.