Integrin β8/ITGB8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401379-ACT

ITGB8 codifica la subunità integrina β8, che si associa con αv per formare il recettore αvβ8, il quale media l’adesione cellula–matrice e la segnalazione bidirezionale tra la matrice extracellulare e il citoscheletro. L’integrina β8 è un regolatore chiave dell’attivazione del TGF-β latente e dei programmi trascrizionali a valle dipendenti da SMAD, influenzando le interazioni epitelio–mesenchimali, la dinamica del citoscheletro e il rimodellamento tissutale. Attraverso il crosstalk con le vie di segnalazione delle adesioni focali, delle Rho GTPasi e delle MAPK, ITGB8 influisce sulla migrazione cellulare, sulla funzione di barriera e sulla modulazione del microambiente immunitario. Alterazioni dell’espressione di ITGB8 o dell’attività di αvβ8 sono state associate al rimodellamento fibrotico e a programmi d’invasione associati ai tumori, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici della biologia del TGF-β e della segnalazione dipendente dalle integrine.

Integrin β8/ITGB8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGB8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin β8/ITGB8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGB8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGB8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin β8/ITGB8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGB8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin β8/ITGB8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin β8/ITGB8 nelle cellule tumorali con espressione di ITGB8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.