Integrin α8/ITGA8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402020-ACT

ITGA8 codifica l’integrina α8, una subunità α che eterodimerizza con β1 per formare un recettore in grado di legare la laminina e la matrice extracellulare, regolando l’adesione cellula–matrice, l’organizzazione del citoscheletro e la meccanotrasduzione. L’integrina α8/ITGA8 contribuisce alla segnalazione delle adesioni focali e a vie a valle che coinvolgono FAK/SRC, le GTPasi della famiglia Rho e le MAPK, le quali coordinano migrazione cellulare, differenziamento e rimodellamento tissutale. È studiata in particolare in contesti mesenchimali e stromali, inclusi lo sviluppo renale e la biologia dei fibroblasti, dove alterazioni della segnalazione mediata dalle integrine possono influenzare la deposizione della matrice extracellulare e la morfogenesi degli organi. Una regolazione aberrante dell’espressione di ITGA8 o della segnalazione integrinica è stata associata a fenotipi fibrotici e al rimodellamento del microambiente tumorale, rendendola rilevante per studi su invasione, sopravvivenza dipendente dall’adesione e programmi trascrizionali guidati dalla matrice.

Integrin α8/ITGA8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin α8/ITGA8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin α8/ITGA8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin α8/ITGA8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin α8/ITGA8 nelle cellule tumorali con espressione di ITGA8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.