Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin α8/ITGA8: sc-402020-ACT

ITGA8 code l’intégrine α8, une sous-unité α qui s’hétérodimérise avec β1 pour former un récepteur se liant à la laminine et à la matrice extracellulaire, et qui régule l’adhérence cellule–matrice, l’organisation du cytosquelette et la mécanotransduction. L’intégrine α8/ITGA8 contribue à la signalisation des adhésions focales et à des voies en aval impliquant FAK/SRC, les GTPases de la famille Rho et la voie MAPK, qui coordonnent la migration cellulaire, la différenciation et le remodelage tissulaire. Elle est particulièrement étudiée dans des contextes mésenchymateux et stromaux, notamment lors du développement du rein et en biologie des fibroblastes, où des altérations de la signalisation médiée par les intégrines peuvent influencer le dépôt de matrice extracellulaire et la morphogenèse des organes. Une expression dérégulée d’ITGA8 ou une signalisation intégrine anormale a été associée à des phénotypes fibrosants et au remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’invasion, de la survie dépendante de l’adhérence et des programmes transcriptionnels induits par la matrice.

Integrin α8/ITGA8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGA8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin α8/ITGA8 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGA8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGA8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin α8/ITGA8. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGA8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin α8/ITGA8 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin α8/ITGA8 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGA8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.