Integrin β5/ITGB5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421177

Panoramica

Itgb5 codifica l’integrina β5, un recettore di adesione transmembrana che si associa principalmente con l’integrina αV per formare il complesso αVβ5, consentendo l’ancoraggio delle cellule ai ligandi della matrice extracellulare, come la vitronectina. Attraverso l’assemblaggio delle adesioni focali e la segnalazione bidirezionale, αVβ5 modula il rimodellamento del citoscheletro e attiva vie quali FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK/ERK, che coordinano migrazione, sopravvivenza e proliferazione. ITGB5 contribuisce inoltre a processi di endocitosi e meccanotrasduzione che influenzano il rimodellamento tissutale, le risposte angiogeniche e le dinamiche epitelio-mesenchimali. Una segnalazione integrinica deregolata e programmi di adesione dipendenti da β5 alterati sono stati implicati in modelli di fibrosi, progressione tumorale e rimodellamento del microambiente infiammatorio, a supporto della sua utilità negli studi meccanicistici dei fenotipi guidati dall’adesione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin β5/ITGB5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Itgb5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Itgb5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Itgb5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Integrin β5/ITGB5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Itgb5 per lo studio della segnalazione di Integrin β5/ITGB5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Itgb5 critici per la funzione di Integrin β5/ITGB5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Itgb5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Integrin β5/ITGB5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Integrin β5/ITGB5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Itgb5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Integrin β5/ITGB5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Integrin β5/ITGB5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Itgb5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Itgb5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.