Integrin β5/ITGB5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401017-ACT

ITGB5 codifica l’integrina β5, un recettore di adesione transmembrana che eterodimerizza con l’integrina αV formando αVβ5, collegando i ligandi della matrice extracellulare al citoscheletro di actina e avviando la segnalazione outside-in. L’integrina β5 regola la dinamica delle adesioni focali, la migrazione cellulare e la sopravvivenza attraverso vie che includono la segnalazione FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK, con ruoli aggiuntivi nell’endocitosi e nel crosstalk con programmi guidati da TGF-β. Modulando le interazioni cellula–matrice e la meccanotrasduzione, ITGB5 influenza il comportamento di cellule epiteliali ed endoteliali, il traffico delle cellule immunitarie e il rimodellamento del microambiente tumorale. Un’espressione o una segnalazione di ITGB5 deregolate sono state associate a invasione, angiogenesi, rimodellamento correlato alla fibrosi e fenotipi metastatici in molteplici contesti patologici.

Integrin β5/ITGB5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGB5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin β5/ITGB5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGB5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGB5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin β5/ITGB5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGB5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin β5/ITGB5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin β5/ITGB5 nelle cellule tumorali con espressione di ITGB5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.