Integrin α5/ITGA5/CD49e Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400546-ACT

ITGA5 codifica l’integrina α5 (CD49e), un recettore di adesione transmembrana che eterodimerizza con l’integrina β1 formando il recettore della fibronectina α5β1. Questo complesso media l’adesione cellula–matrice extracellulare e una segnalazione bidirezionale che coordina l’assemblaggio delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro di actina e la meccanotrasduzione, integrando segnali provenienti dalle vie FAK/SRC, PI3K–AKT e MAPK. Attraverso la regolazione della migrazione, proliferazione e sopravvivenza cellulare, ITGA5 contribuisce alla morfogenesi dei tessuti, alla riparazione delle ferite e alle risposte angiogeniche. Un’espressione o una segnalazione di ITGA5 deregolate sono spesso studiate in contesti di invasione e metastasi tumorale, fibrosi e rimodellamento infiammatorio, in cui alterate interazioni cellula–matrice guidano fenotipi patologici.

Integrin α5/ITGA5/CD49e Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin α5/ITGA5/CD49e Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin α5/ITGA5/CD49e. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin α5/ITGA5/CD49e nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin α5/ITGA5/CD49e nelle cellule tumorali con espressione di ITGA5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.