Integrin α5/ITGA5/CD49e CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400546-ACT

ITGA5 kodiert Integrin α5 (CD49e), einen transmembranen Adhäsionsrezeptor, der mit Integrin β1 heterodimerisiert und so den α5β1-Fibronectin-Rezeptor bildet. Dieser Komplex vermittelt die Anheftung von Zellen an die extrazelluläre Matrix sowie bidirektionale Signalübertragung, die den Aufbau fokaler Adhäsionen, den Umbau des Aktin-Zytoskeletts und die Mechanotransduktion koordiniert und dabei Signale aus den FAK/SRC-, PI3K–AKT- und MAPK-Signalwegen integriert. Über die Regulation von Zellmigration, Proliferation und Überleben trägt ITGA5 zur Gewebemorphogenese, Wundheilung und angiogenen Antworten bei. Eine fehlregulierte ITGA5-Expression oder -Signalgebung wird häufig im Kontext von Tumorinvasion und Metastasierung, Fibrose sowie inflammatorischem Remodelling untersucht, bei denen veränderte Zell–Matrix-Interaktionen pathogene Phänotypen antreiben.

Integrin α5/ITGA5/CD49e Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGA5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin α5/ITGA5/CD49e Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGA5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGA5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin α5/ITGA5/CD49e-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGA5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin α5/ITGA5/CD49e-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin α5/ITGA5/CD49e-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGA5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.