Integrin β4/ITGB4/CD104 Plasmide Double Nickase (h): sc-400573-NIC

ITGB4 codifica per l’integrina β4 (CD104), un recettore di adesione transmembrana che si associa prevalentemente all’integrina α6 per formare α6β4, un componente centrale degli emidesmosomi che collegano le cellule epiteliali alla membrana basale tramite le laminine. Attraverso l’accoppiamento ai filamenti intermedi e il crosstalk con le adesioni focali e la segnalazione dei fattori di crescita, ITGB4 regola la polarità cellulare, l’organizzazione del citoscheletro e la migrazione, con effetti a valle sulle vie dipendenti da PI3K–AKT, MAPK e dalle GTPasi Rho. Un’alterata espressione o localizzazione di ITGB4 è associata a una deregolazione dell’integrità epiteliale e a un aumento del comportamento invasivo in diversi contesti di carcinoma, e varianti patogene sono collegate a malattie bollose dovute a una compromissione dell’adesione dermo-epidermica. Queste caratteristiche biologiche rendono ITGB4 un bersaglio utile per studiare la segnalazione dipendente dall’adesione, il rimodellamento epiteliale e i fenotipi guidati dalla matrice extracellulare.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGB4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGB4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGB4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGB4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.