Integrin β4/ITGB4/CD104 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-431434-ACT

Itgb4 codifica l’integrina β4 (ITGB4/CD104), un recettore di adesione transmembrana che si associa principalmente con l’integrina α6 per formare α6β4, un recettore chiave della laminina nell’ancoraggio degli epiteli alla membrana basale. Attraverso l’assemblaggio degli emidesmosomi e il crosstalk con le adesioni focali e con la segnalazione dei fattori di crescita, ITGB4 contribuisce a coordinare la polarità cellulare, la migrazione e le vie di sopravvivenza, incluse le cascate di segnalazione PI3K–AKT e MAPK. Un’espressione o una segnalazione alterata di ITGB4 è associata a cambiamenti nell’integrità epiteliale, nel comportamento invasivo e nel rimodellamento della matrice extracellulare, rendendola rilevante per studi sulla progressione dei carcinomi, la riparazione delle ferite e il rimodellamento tissutale infiammatorio. Nei sistemi murini, Itgb4 è spesso utilizzato per analizzare le interazioni epitelio–stroma e le reti di segnalazione dipendenti dall’adesione in modelli organotipici e in vivo.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Itgb4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Itgb4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Itgb4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin β4/ITGB4/CD104. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Itgb4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin β4/ITGB4/CD104 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin β4/ITGB4/CD104 nelle cellule tumorali con espressione di Itgb4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.