Integrin β3/ITGB3/CD61 Plasmide Double Nickase (h): sc-400216-NIC

ITGB3 codifica l’integrina β3 (CD61), un recettore di adesione transmembrana che forma eterodimeri con l’integrina αIIb o αV generando i complessi αIIbβ3 e αVβ3, in grado di legare ligandi della matrice extracellulare e di trasmettere segnali bidirezionali attraverso la membrana plasmatica. Tramite l’accoppiamento con regolatori delle adesioni focali e del citoscheletro, l’integrina β3 modula l’adesione cellulare, lo spreading, la migrazione e la meccanotrasduzione, attivando vie quali FAK/SRC, PI3K–AKT e le GTPasi della famiglia Rho. Nelle piastrine e nei megacariociti, la segnalazione di αIIbβ3 è fondamentale per l’aggregazione e la formazione del trombo, mentre αVβ3 contribuisce alle interazioni tra endotelio e cellule tumorali con la matrice. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ITGB3 sono state associate a una disregolazione dell’emostasi, della biologia vascolare, dell’infiammazione e dell’invasione e metastatizzazione correlate al cancro, rendendolo un nodo ampiamente studiato nelle reti di segnalazione dipendenti dall’adesione.

Integrin β3/ITGB3/CD61 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGB3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGB3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGB3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGB3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.